Selasa, 25 Desember 2012

Bakteri Pseudomonas fluorescens


Diskripsi
Bakteri Pseudomonas fluorescens dapat menghasilkan spora, bersifat aerobik, gram negatif, banyak ditemukan pada daerah rizofir dan tanah, serta lebih efektif pada tanah netral dan basa. Penanaman pada tanah yang lembab dapat meningkatkan populasi P.fluorescens. Kolonisasi akar oleh P. Fluorescens merupakan persyaratan sebagai agens biokontrol.
Proses Antagonis
Tipe mekanisme antagonis P. fluorescens dengan P. tolaasii berupa kompetisi unsur hara. Dapat menekan perkembangan Fusarium sp. melalui kompetisi terhadap unsur Fe yang tersedia.
Cara Aplikasi
Bakteri P. fluorescens dapat diaplikasikan pada benih saat sebelum tanam. Aplikasi pada benih dapat menekan penyakit rebah kecambah (damping-off) yang disebabkan cendawan Rhizoctonia solani.
Perbanyakan Bakteri Pseudomonas fluorescens
Untuk memperbanyak P. fluorescens dilaksanakan dua tahapan yaitu pembuatan media dan perbanyakan bakteri.
A.    Pembuatan media
1.      Bahan
Ada dua media yang diperlukan (media King’s B untuk perbanyakan starter dan media cair untuk perbanyakan masal) dengan komposisi sebagai berikut.

Bahan
Takaran
King’s B
Cair
Gliserol
10,0 gr
-
Protease pepton
20,0 gr
-
MgSO47H2O
1,5 gr
-
K2HPO4
1,5 gr
-
Agar Swallow
15,0 gr
-
Kentang
-
300,0 gr
Sukrosa
-
17,0 gr
Air destilasi
1,0 l
1,0 l
KOH
-
HCl
-
Kapas
-
Alumunium foil

1.      Alat
o   Autoklaf
o   Fermentor sederhana
o   Kotak pemindah
o   pH-meter
o   Jarum ose
o   Tabung reaksi
o   Erlenmeyer
o   Panci
o   Kompor
o   Saringan
2.      Cara Kerja/Pembuatan
Media Padat/Media King’s B
o   Campurkan bahan-bahan : gliserol (10,0 g), protease pepton (20,0 g), MgSO47H2O (1,5 g), K2HPO4 (1,5 g), agar swallow (15,0 gr), dan air destilasi (1,0 l); kemudian panaskan dalam panci, aduk sampai agar larut dan terlihat homogen;
o   Tes pH larutan sampai 7,2 dengan pH-meter. Tambahkan KOH (setetes demi setetes), kalau pHnya kurang dari 7,2; tetapi tambahkan HCl, kalau pHnya lebih dari 7,2;
o   Masukkan larutan ke dalam tabung reaksi sebanyak 7-10 ml per tabung, kemudian tutup dengan kapas. Bungkus 5 tabung reaksi menjadi satu menggunakan alumunium foil;
o   Masukkan tabung reaksi ke dalam erlenmeyer, kemudian sterilkan dengan autoklaf pada suhu 121 oC, tekanan 1 atm dan waktu 15 menit
o   Setelah tekanan dalam autoklaf turun, keluarkan media, dan buatlah agar miring. Setelah dingin, agar miring dapat digunakan atau disimpan dalam almari es.

Media Cair
o   Cuci 300 g kentang hingga bersih, potong tipis-tipis dengan ketebalan 3 mm;
o   Masukkan ke dalam panci dan tambahkan air destilasi sebanyak 1,0 l;
o   Rebus di atas api sedang sampai irisan kentang memutih (kurang lebih 10 menit);
o   Saring ekstrak larutan kentang tersebut dan tampung/pindahkan dalam erlenmeyer;
o   Tambahkan 17,0 g sukrosa, aduk sampai larut, kemudian saring kembali dan tutup erlenmeyer dengan alumunium foil;
o   Sterilkan dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121oC dan tekanan 1 atmosfir;
o   Keluarkan media setelah tekanan autoklaf turun dan kemudian media didinginkan

A.    Perbanyakan Bakteri
1.      Perbanyakan Isolat Bakteri (starter)
o   Sterilkan kotak pemindahan, jarum ose, dan tangan dengan NaOCl 1%;
o   Masukkan bahan media agar miring King’s B, isolat P. fluorescens, jarum ose, dan lampu bunsen ke dalam kotak pemindah, kemudian nyalakan lampu bunsen;
o   Jepitkan tabung isolat P. fluorescens di antara media agar miring dan isolat starter di antara jari tangan kiri (dengan mulut tabung dekat ujung api lampu bunsen);
o   Buka tutup tabung reaksi dan inokulasikan isolat P. fluorescens ke media miring dengan jarum ose yang telah disterilkan;
o   Kembalikan tutup tabung masing-masing dan simpan dalam inkubator atau tempat yang bersih.
2.      Perbanyakan Masal Bakteri
o   Sterilkan kotak pemindahan, alat-alat, dan tangan dengan NaOCl 1%;
o   Masukkan isolat bakteri P. fluorescens (starter) pada media King’s B di atas dan alat-alat ke dalam tabung pemindahan, kemudian nyalakan lampu bunsen;
o   Tambahkan 5 ml aquades steril ke dalam tabung isolat starter P. fluorescens dan lepaskan koloni bakteri dengan bantuan jarum ose steril (lakukan dalam kotak pemindahan);
o   Masukkan/pindahkan larutan bakteri P. fluoroscens di atas ke dalam media perbanyakan (media cair) secara aseptik
o   Inkubasikan dengan menggunakan fermentor sederhana dalam ruangan bersih pada suhu antara 25-27oC.


Tidak ada komentar:

Poskan Komentar