Diskripsi
Bakteri
Pseudomonas fluorescens dapat
menghasilkan spora, bersifat aerobik, gram negatif, banyak ditemukan pada
daerah rizofir dan tanah, serta lebih efektif pada tanah netral dan basa.
Penanaman pada tanah yang lembab dapat meningkatkan populasi P.fluorescens. Kolonisasi akar oleh P. Fluorescens merupakan persyaratan
sebagai agens biokontrol.
Proses
Antagonis
Tipe
mekanisme antagonis P. fluorescens
dengan P. tolaasii berupa kompetisi
unsur hara. Dapat menekan perkembangan Fusarium
sp. melalui kompetisi terhadap unsur Fe yang tersedia.
Cara
Aplikasi
Bakteri P. fluorescens dapat diaplikasikan pada
benih saat sebelum tanam. Aplikasi pada benih dapat menekan penyakit rebah
kecambah (damping-off) yang disebabkan cendawan Rhizoctonia solani.
Perbanyakan
Bakteri Pseudomonas fluorescens
Untuk
memperbanyak P. fluorescens dilaksanakan
dua tahapan yaitu pembuatan media dan perbanyakan bakteri.
A.
Pembuatan
media
1.
Bahan
Ada
dua media yang diperlukan (media King’s B untuk perbanyakan starter dan media
cair untuk perbanyakan masal) dengan komposisi sebagai berikut.
Bahan
|
Takaran
|
|
King’s
B
|
Cair
|
|
Gliserol
|
10,0
gr
|
-
|
Protease
pepton
|
20,0
gr
|
-
|
MgSO47H2O
|
1,5
gr
|
-
|
K2HPO4
|
1,5
gr
|
-
|
Agar
Swallow
|
15,0
gr
|
-
|
Kentang
|
-
|
300,0
gr
|
Sukrosa
|
-
|
17,0
gr
|
Air
destilasi
|
1,0
l
|
1,0
l
|
KOH
|
√
|
-
|
HCl
|
√
|
-
|
Kapas
|
√
|
-
|
Alumunium
foil
|
√
|
√
|
1.
Alat
o
Autoklaf
o
Fermentor sederhana
o
Kotak pemindah
o
pH-meter
o
Jarum ose
o
Tabung reaksi
o
Erlenmeyer
o
Panci
o
Kompor
o
Saringan
2.
Cara
Kerja/Pembuatan
Media
Padat/Media King’s B
o
Campurkan bahan-bahan : gliserol (10,0
g), protease pepton (20,0 g), MgSO47H2O (1,5 g), K2HPO4
(1,5 g), agar swallow (15,0 gr), dan air destilasi (1,0 l); kemudian
panaskan dalam panci, aduk sampai agar larut dan terlihat homogen;
o
Tes pH larutan sampai 7,2 dengan
pH-meter. Tambahkan KOH (setetes demi setetes), kalau pHnya kurang dari 7,2;
tetapi tambahkan HCl, kalau pHnya lebih dari 7,2;
o
Masukkan larutan ke dalam tabung reaksi
sebanyak 7-10 ml per tabung, kemudian tutup dengan kapas. Bungkus 5 tabung
reaksi menjadi satu menggunakan alumunium foil;
o
Masukkan tabung reaksi ke dalam
erlenmeyer, kemudian sterilkan dengan autoklaf pada suhu 121 oC,
tekanan 1 atm dan waktu 15 menit
o
Setelah tekanan dalam autoklaf turun,
keluarkan media, dan buatlah agar miring. Setelah dingin, agar miring dapat
digunakan atau disimpan dalam almari es.
Media
Cair
o
Cuci 300 g kentang hingga bersih, potong
tipis-tipis dengan ketebalan 3 mm;
o
Masukkan ke dalam panci dan tambahkan
air destilasi sebanyak 1,0 l;
o
Rebus di atas api sedang sampai irisan
kentang memutih (kurang lebih 10 menit);
o
Saring ekstrak larutan kentang tersebut
dan tampung/pindahkan dalam erlenmeyer;
o
Tambahkan 17,0 g sukrosa, aduk sampai
larut, kemudian saring kembali dan tutup erlenmeyer dengan alumunium foil;
o
Sterilkan dalam autoklaf selama 15 menit
pada suhu 121oC dan tekanan 1 atmosfir;
o
Keluarkan media setelah tekanan autoklaf
turun dan kemudian media didinginkan
A.
Perbanyakan
Bakteri
1.
Perbanyakan
Isolat Bakteri (starter)
o
Sterilkan kotak pemindahan, jarum ose,
dan tangan dengan NaOCl 1%;
o
Masukkan bahan media agar miring King’s
B, isolat P. fluorescens, jarum ose,
dan lampu bunsen ke dalam kotak pemindah, kemudian nyalakan lampu bunsen;
o
Jepitkan tabung isolat P. fluorescens di antara media agar
miring dan isolat starter di antara jari tangan kiri (dengan mulut tabung dekat
ujung api lampu bunsen);
o
Buka tutup tabung reaksi dan
inokulasikan isolat P. fluorescens ke
media miring dengan jarum ose yang telah disterilkan;
o
Kembalikan tutup tabung masing-masing
dan simpan dalam inkubator atau tempat yang bersih.
2.
Perbanyakan
Masal Bakteri
o
Sterilkan kotak pemindahan, alat-alat,
dan tangan dengan NaOCl 1%;
o
Masukkan isolat bakteri P. fluorescens (starter) pada media
King’s B di atas dan alat-alat ke dalam tabung pemindahan, kemudian nyalakan
lampu bunsen;
o
Tambahkan 5 ml aquades steril ke dalam
tabung isolat starter P. fluorescens dan
lepaskan koloni bakteri dengan bantuan jarum ose steril (lakukan dalam kotak
pemindahan);
o
Masukkan/pindahkan larutan bakteri P. fluoroscens di atas ke dalam media
perbanyakan (media cair) secara aseptik
o
Inkubasikan dengan menggunakan fermentor
sederhana dalam ruangan bersih pada suhu antara 25-27oC.
Tidak ada komentar:
Posting Komentar